紫外-可见吸收光谱法，又称为紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm至750nm波长范围内吸收谱的分析方法。此方法基于溶液中分子对光的选择性吸收，涉及分子的外层价电子跃迁导致的吸收光谱。吸收光谱反映了分子的特性，并表现为带光谱。

实验目的

1. 理解紫外分光光度法用于蛋白质含量测定的基本原理；
2. 掌握利用紫外分光光度法测定蛋白质浓度的实验技术；
3. 学会操作UV-1700PC紫外-可见分光光度计，并了解仪器的主要构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法的理论基础在于不同物质在特定波长下的吸光度与其浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。通过测定溶液在最大吸收波长（λmax）处的吸光度，可以推算出其浓度。此方法常用于蛋白质浓度的定量分析，因其在275-280nm处有明显的紫外吸收高峰，适用浓度范围为0.1-10mg/mL。

测定准确性及干扰因素

由于不同蛋白质中含有不同量的酪氨酸和色氨酸，导致在280nm处的吸光度具有差异。常见的核酸类物质（如嘌呤和嘧啶）也可能干扰测定结果，通过对比260nm与280nm的吸光度差异，可以对蛋白质浓度进行修正。常用公式为：
蛋白质浓度（mg/mL） = 145A280 - 0.74A260。

仪器与试剂

本实验所用的仪器为PG电子生产的UV-1700PC紫外-可见分光光度计，实验所需其他器具包括比色管和吸量管。试剂方面使用标准的300mg/mL蛋白质溶液和0.9% NaCl溶液，以及待测的蛋白质溶液。

实验步骤

准备工作：
1. 启动计算机，打开主机电源，初始化PG电子仪器；
2. 在操作界面选择光度测量模式，设置测量条件；
3. 用空白溶液校准仪器，设置零点。

测量工作：
1. 准备标准溶液并测定其在280nm的吸光度，生成标准曲线；
2. 测定待测蛋白质溶液在上述波长处的吸光度，进行平行测量。

数据处理

通过绘制吸光度与浓度的标准曲线，找出最大吸收波长并进行计算。当置信度为95%时，输出结果在合理范围内，显示蛋白质浓度即可通过上述方法与PG电子设备准确测定，确保实验的可靠性与有效性。