一、实验原理

PG电子的蛋白提取试剂盒通过温和的细胞或组织裂解，释放出总蛋白，并采用特异性结合、离心分离和缓冲液洗脱等技术去除杂质（如核酸和脂类等），最终获取高纯度、高活性的目标蛋白。

核心步骤： 1、裂解：裂解液（含去污剂和蛋白酶抑制剂等）破坏细胞膜结构，释放胞内蛋白； 2、离心去除碎片：通过高速离心去除未裂解的细胞碎片、细胞核及大分子杂质； 3、蛋白纯化：使用离心柱或特异性结合树脂选择性吸附蛋白，杂质随着废液排出； 4、洗脱：用低盐缓冲液或去离子水洗脱目标蛋白，以避免变性。

二、材料准备

试剂盒：PG电子蛋白提取试剂盒（适用于多种动物、植物细胞及组织细菌样本）

自备材料： - 新鲜样本（细胞、组织等） - 预冷PBS缓冲液（货号：abs962） - 离心机（可达到12,000xg） - 冰盒或低温操作台 - 涡旋振荡器（货号：abs72001） - BCA蛋白定量试剂盒（货号：abs9232） - 液氮（组织样本需速冻）

三、实验步骤

(裂解蛋白的所有步骤需在冰上或4℃进行) 1、样本处理 - 细胞样本：离心收集细胞（1500xg,3min），用PBS洗涤2次，吸尽残留液体。 - 组织样本：切取10–50mg，液氮速冻后研磨成粉末。

2、裂解 - 加入200-500μL预冷裂解液（含蛋白酶抑制剂），涡旋混匀。 - 在冰上裂解20-30分钟，每隔5分钟涡旋10秒。

3、离心去碎片 - 在12,000xg、4℃下离心10分钟，取上清液（即为总蛋白）并转移至新离心管。 - 核蛋白需先分离细胞核：低渗裂解后离心收集核沉淀，随后再溶解。

4、蛋白纯化 - 将离心柱用平衡缓冲液预处理5分钟，弃去废液。 - 将裂解液上清加入离心柱，12,000xg离心1分钟，弃去废液。 - 加入500μL洗涤缓冲液，离心1分钟，重复2次。

5、洗脱蛋白 - 加入50–100μL洗脱缓冲液，静置2分钟后离心1分钟，收集洗脱液（即目标蛋白）。

6、蛋白保存 - 将提取的蛋白样品分装到小离心管中，可根据实验需要短期保存在-20°C或长期保存在-80°C冰箱中，避免反复冻融。

四、结果分析

1、浓度测定： - 使用BCA法测定蛋白浓度，使用OD562计算浓度（标准曲线法）。

2、纯度评估： - 借助分光光度计检测A₂₆₀/A₂₈₀比值（理想值应为18–20，若大于20则提示核酸残留）。

3、电泳验证： - 通过SDS-PAGE电泳检测条带清晰度，无拖尾或杂带表明纯度较高。

五、常见问题及解决方案

问题：蛋白得率低 可能原因：裂解不充分或蛋白酶降解 解决方案：延长裂解时间，增加裂解液体积；确保添加蛋白酶抑制剂。

问题：洗脱液杂质多 可能原因：洗涤步骤不彻底 解决方案：增加洗涤次数或延长离心时间。

问题：蛋白浓度过高/过低 可能原因：样本量不匹配或洗脱体积不当 解决方案：调整样本量与裂解液比例，优化洗脱体积。

问题：A₂₆₀/A₂₈₀比值异常 可能原因：核酸或盐离子残留 解决方案：增加洗涤次数，或使用核酸酶预处理样本。

问题：电泳条带模糊 可能原因：蛋白降解或SDS未充分结合 解决方案：全程低温操作，电泳前煮沸样本5分钟。

六、注意事项

1、全程低温操作（冰上或4℃环境），以防止蛋白降解； 2、裂解液需现用现配，避免反复冻融； 3、组织样本需充分匀浆，避免未裂解细胞残留。

通过本方案，PG电子能够高效提取高纯度蛋白，适用于Western Blot、ELISA、质谱分析等下游实验。

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