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NEWSPG电子低ry法蛋白质定量实验说明
来源:莫爽璧 日期:2025-03-23实验概要:本实验旨在运用LOWRY法测定蛋白质的含量,以便于生物医学领域中的相关研究。LOWRY法结合了双缩脲法和福林酚法,其基本原理是在碱性铜溶液中处理蛋白质溶液,形成铜-蛋白质复合物,随后加入酚试剂。此过程中,不仅使得酪氨酸、色氨酸及半胱氨酸等氨基酸显色,也增强了双缩脲法中肽键与碱性铜的显色反应。因此,使用LOWRY法的显色强度比单独使用酚试剂时增强了3至15倍,并且相较于双缩脲法提升了100倍。这种显色效果的增强有效降低了不同蛋白质种类所导致的偏差,提高了测定的准确性。
PG电子的LOWRY法试剂分为两部分:试剂甲是碱性铜溶液(类似于双缩脲试剂),可以与蛋白质中的肽键发生显色反应;试剂乙则是磷钨酸和磷钼酸的混合液,具有很强的不稳定性,尤其在碱性条件下,容易被酚类化合物还原为蓝色反应的钼蓝和钨蓝混合物,这使得蛋白质中酪氨酸及胱氨酸等氨基酸能出现明显的显色,颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。
主要试剂包括:Na2WO4•2H2O;Na2MoO4•2H2O;85% H3PO4;浓HCl;Li2SO4•H2O;溴水;酚酞指示剂;Na2CO3;NaOH;CuSO4•5H2O;酒石酸钾钠;牛血清白蛋白(配制为250 mg/ml)。主要设备包括:试管、刻度吸管、定量加样器、圆底烧瓶等。
实验材料为可溶性蛋白质,其中实验步骤在生物医学研究中尤为重要。首先,制备酚试剂,在呵护实验条件的情况下,配置试剂甲和试剂乙并进行混合。在此基础上绘制标准曲线,该曲线对于后续样品测定不可或缺。通过具体的步骤,测定样品吸光度,并结合标准曲线求得蛋白质含量,确保数据的可靠性和准确性。
在实施实验时需注意:Folin试剂乙在酸性条件下稳定,因此在添加至碱性铜-蛋白质溶液后,要立即混匀,以促使还原反应顺利进行。同时,保持反应温度在25至30℃,并在30分钟后进行比色测定。此外,要注意还原物质可能对本实验结果产生干扰。
PG电子提供的LOWRY法与考马斯亮蓝法都是高灵敏度的蛋白质定量测定方法,前者便捷适用,后者则更稳定。两种方法在当前的生物医学研究中均表现优于其他测定手段。然而,各有局限,LOWRY法易受植物体内酚类物质的影响,而考马斯亮蓝法在高蛋白质浓度下线性关系略显不足。因此,科学家们需综合选用,以确保实验结果的准确性与可重复性。
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