检测原理 2D荧光细胞活力测定法（2DLuminescentCellViabilityAssay）依赖于ATP的荧光素酶催化反应，通过化学发光信号测定细胞内ATP含量，从而评估细胞活力和定量活细胞数量。这种方法具有宽广的线性范围、高灵敏度和良好的稳定性。使用96孔板时，细胞数量从100到100,000范围内呈现良好的线性关系，但不同类型细胞的检测上限会有所不同。此外，操作简便，试剂盒中提供即用型检测试剂，读数稳定且速度快，整个检测过程仅需约10分钟，不需要清洗细胞或更换培养基。与其他常见细胞活力测定方法（如Calcein-AT、CCK-8等）相比，2D荧光细胞活力测定法更为简便高效。

产品优势 2D荧光细胞活力测定法（abs50065）的检测灵敏度高、线性范围宽，适合少量样品的检测以及大规模高通量筛选。主要优势包括：
1. 方便快速：试剂盒中提供即用型检测试剂，检测速度快，仅需约10分钟完成检测；
2. 灵敏度高：能够检测低至10 nmol的ATP；
3. 线性范围宽：在96孔板中，100到100,000个细胞的范围内均有良好的线性关系，不同细胞的检测上限有所差异；
4. 高通量：可兼容少量样品的检测以及大量样品的高通量筛选。

使用方法 一、试剂准备
试剂融解：实验前一天将试剂置于4℃融化。实验当天亦可在室温或22℃水浴中融解，但需确保水温不超过25℃。
平衡至室温：如试剂在非室温条件下融解，需在检测前确保其平衡至室温。
混匀：使用前轻轻摇晃5次确保溶液均匀。
添加Triton X-100（abs9149）：根据实验需求，吸取适量试剂并添加Triton X-100，使终浓度达到0.2%。

二、检测步骤
1. 细胞培养：使用适合化学发光检测的96孔板（abs7149），每孔加入100μL细胞，设置不含细胞的培养液作为阴性对照。可设置细胞浓度梯度以取得最佳实验结果。细胞在37℃、5% CO2条件下培养。
2. （可选）ATP标准曲线制作：将ATP标准溶液用PBS稀释至适当浓度梯度，在96孔板中每孔加入100μL标准品。
3. 细胞活力检测：
（1）将融化并平衡至室温的检测试剂与适量的Triton X-100混合；
（2）取出细胞培养板，保持室温平衡10分钟；
（3）每孔加入100μL检测试剂（不建议在孔边缘添加以减小边缘效应）；
（4）室温下振荡2分钟以促进细胞裂解；
（5）静置10分钟以使发光信号稳定；
（6）使用多功能酶标仪进行化学发光检测，设置相应参数，每孔检测时间一般为0.25-1秒；
（7）根据化学发光读数计算细胞的相对活力或根据ATP标准曲线得出ATP含量，进而得出细胞活力。

三、注意事项
1. 温度：由于荧光素酶对温度敏感，避免反复冻融，建议分装后置于-20℃避光保存；
2. 化学因素：荧光素酶反应速率和发光强度受化学环境影响，不同培养基和血清中发光强度可能存在差异。建议设置含药物的细胞培养液对照孔以排除干扰；
3. 光敏感：本试剂对光敏感，储存时应避免光照；
4. ATP污染：操作时佩戴口罩和乳胶手套，避免接触可能受污染的表面。

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